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茶葉中茶氨酸的HPLC檢測方案

茶氨酸(L-Theanine)是茶葉中特有的游離氨基酸,茶氨酸是谷氨酸γ-乙基酰胺,有甜味。茶氨酸含量因茶的品種、部位而變動。茶氨酸在干茶中占重量的1%-2%。茶氨酸在化學構造上與腦內活性物質谷酰胺、谷氨酸相似,是茶葉中生津潤甜的主要成份。茶氨酸含量約為新茶的1~2%左右,其含量隨發酵過程減少。

茶氨酸可以明顯促進腦中樞多巴胺(dopamine)釋放 ,飲茶抗疲勞作用被認為在一定程度上來自這一效果。茶氨酸對腦內中樞神經遞質5-羥色胺分泌量具有調節作用,還可以增強記憶能力,提高學習效率。保健食品市場上多數是為成人防病或改善作用的品種。像茶氨酸這種既不具有催眠,又可以解消疲勞、降低血壓和提高學習記憶能力的保健食品實為少見,引人注目。為此,茶氨酸曾在1998年德國召開的國際食品原料會上獲得研究部門大獎。

鑒于茶氨酸在市場上的應用日趨增長,賽智科技參照GB23193-2008,利用LC-10Tvp高效液相色譜儀給出了茶氨酸的HPLC檢測方案。

(本應用方案請勿轉載,侵權必究)

1、儀器與試劑

1.1儀器、設備

LC-10Tvp高效液相色譜儀

Vertex 色譜柱:250mm×4.6mm×5μm

分析天平

振搖恒溫水浴

離心機

C18固相萃柱

針頭過濾器

微孔濾膜:0.45μm

1.2試劑

茶氨酸標準品

鄰苯二甲醛(OPA)

乙硫醇

硼酸

氫氧化鈉

甲醇(色譜純)

乙腈(色譜純)  

2、供試品溶液和對照品溶液的制備

對照品溶液的制備   取茶氨酸儲備液(1mg/ml)適量,用水稀釋成所需濃度。

供試品溶液的制備  

1、樣品前處理:茶葉樣品經磨碎混勻后,準確稱取0.5g(精確到0.001g),加水100ml,在80℃振搖恒溫水浴中浸提45min,冷卻后將浸提液離心,過濾,上清液混勻待用。

2、凈化:C18小柱活化:依次用5ml甲醇,5ml水加入到凈化小柱中,將上述試液過固相萃取柱,在經過0.46um濾膜過濾到棕色試管中,待衍生用。

3、衍生:準確吸取茶氨酸標準使用液(或樣品液)0.5ml于棕色試管中,加入0.5mlOPA衍生試劑,反應2min后,立即取10ml上機分析。

3、色譜條件

色譜柱:C18, 4. 6 mmx250 mm,粒度5 μm

流動相:以20mmol/l乙酸銨溶液為流動相A,以20mmol/l乙酸銨溶液:甲醇:乙腈=1:2:2為流動相B,VA:VB=1:1

波長:338nm

流速:1. 0 mL/min

柱溫:40℃

4、測定法

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul,注入液相色譜儀,測定,即得

5、色譜圖

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