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嘔吐毒素的HPLC檢測方案

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)又稱嘔吐毒素(vomitoxin),主要是由鐮刀菌的某些種產生的化學結構和生物活性相似的有毒代謝產物——單端孢霉烯族化合物中的一種。DON 的主要產生菌是禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum),據報道也有其它一些鐮刀菌可產生 。DON的化學名為3a,7a,l5一三羥基一l2,l3一環氧單端孢酶一9一烯I8酮,是一種B型單端孢酶烯族化合物,為一種倍半烯衍生物。分子量為296.3,分子式為C15 H20O6 ,結晶為無色針狀,熔點為l5l~153 ℃,α,β一不飽和酮基致使其在短波紫外下有吸收峰。但此紫外吸收與其它許多物質紫外吸收相重疊,并非特征性的。DON易溶于水和極性溶劑甲醇、乙醇、乙腈、丙酮及乙酸乙酯,但不溶于正己烷和乙醚。1988年Shepherd和Gilbert證實DON在有機溶劑中穩定,因此乙酸乙酯和乙腈是最適合的溶劑,長期儲存更是如此。DON耐熱、耐壓,弱酸中不分解,加堿及高壓處理可以破壞其部分毒力。DON的耐藏力也很強。據報道病麥經4年的貯藏,其中的DON仍能保留原有的毒性 。

DON廣泛存在于全球,主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物,也污染糧食制品,人和動物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產生廣泛的毒性效應。另外,它還常與其它的霉鹵毒素如黃曲霉毒素共同污染農作物,進入人體后可以相互影響。近年來發現DON可能與人類食管癌、IgA腎病有關,對人類及動物的健康構成威脅。DON屬于劇毒或中等毒物,研究表明,DON在體內可能有一定的蓄積,但無特殊的靶器官,具有很強的細胞毒性。人畜攝入了被DON污染的食物/飼料后,會導致厭食、嘔吐、腹瀉、發燒、站立不穩、反應遲鈍等急性中毒癥狀,嚴重時損害造血系統造成死亡,但不同的動物對DON的敏感程度不一,豬是最敏感的動物。研究表明,DON可能對免疫系統有影響,有明顯胚胎毒性和一定致畸作用,可能有遺傳毒性,但無致癌、致突變作用。由于DON的危害嚴重,引起了各國的普遍重視。谷物及飼料中DON的含量有嚴格的限量標準。我國谷物中DON 的限量標準為1.0 mg/kg 。

樣品處理過程:

標準儲備液: 準確稱取一定量標準品,用甲醇+乙腈(1+1)溶解,配成0.1mg/ml的標準液。標準工作液:根據使用需要準確吸取一定量的嘔吐毒素儲備液,用流動相稀釋,分別配成相當于1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的標準工作液。用0.45μm的有機系濾膜過濾,精密量取10μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。

樣品處理:選取有代表性的樣品粉碎過40目篩,稱取25g(精確至0.01g)樣品于250mL具塞三角瓶中,加5.0g聚乙二醇,加入100mL水,置于回旋式震蕩期中200r/min震蕩20min,靜置,用定量濾紙過濾后再用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清,待凈化。

凈化過程略。

色譜條件:

色譜柱: C18反相色譜柱, 4.6 mm*250 mm,粒度5 μm

流動相:甲醇:水=20:80

波長:218nm  

流速:1.0mL/min

進樣量:10μL

柱溫:30℃

儀器配置:

色譜圖:

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